很多朋友对于叶绿素荧光仪使用方法和荧光分光光度计 荧光仪的使用方法及步骤不太懂，今天就由小编来为大家分享，希望可以帮助到大家，下面一起来看看吧！
一、荧光分光光度计测试步骤是怎么样的
1.液体样品根据用户提供的技术指标，检查浓度范围是否合适，如果需要稀释，则要考虑所需溶剂类型和稀释倍数。
2.固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品，均可直接测定。
1.开机：接通电源，打开主机开关，点燃(打开)光源后，根据说明书要求启动计算机。
2.检测前准备：参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。
3.工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等)。
设置仪器参数，扫描发射波长，找到maxλem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。
设置仪器参数，扫描激发波长，找到maxλex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
设置仪器参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在一定的工作方式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱。
选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。
选择合适的测量参数，设置λex、λem，采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。
配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测定条件下，设置λex、λem，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度—浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。
1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他光谱由仪器控制电脑直接绘出。
2.峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示。
3.定量测试：在相同的测定条件下，测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度，绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶液的荧光强度测定后，由工作曲线求出该溶液的浓度。
1.在实验开始前，应提前打开仪器预热，并配制好所需的溶液，对于已经配制好的溶液，在不用时放在4℃冰箱中保存，放置时间超过一星期的溶液要重新配制。
2.实验所用的样品池是四面透光的石英池，拿取的时候用手指掐住池体的上角部，不能接触到四个面，清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。
3.在测试样品时，注意荧光强度范围的设定不要太高，以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。
4.实验结束后，要及时的清理台面，处理废液，清洗和放置好样品池，将下次要用的溶液放回冰箱，并且按规定登记实验记录，养成良好的实验习惯。
二、怎样正确使用原子荧光分光光度计及注意事项
原子荧光光度计利用硼氢化钾或硼氢化钠作为还原剂，将样品溶液中的待分析元素还原为挥发性共价气态氢化物（或原子蒸汽），然后借助载气将其导入原子化器，在氩—氢火焰中原子化而形成基态原子。
原子荧光分光光度计的使用注意事项：
1、在开启仪器前，一定要注意开启载气。
2、检查原子化器下部去水装置中水封是否合适。
3、试验时注意在气液分离器中不要有积液，以防溶液进入原子化器。
4、在测试结束后，一定要运行仪器用水清洗管道。关闭载气，并打开压块，放松泵管。
5、更换元素灯，一定要在主机电源关闭的情况下，不能带电插拔。
6、元素灯得预热必须是在进行测量时点灯的情况下才能达到预热稳定的作用，只打开主机，元素灯虽然也亮，氮起不到预热稳定的作用。
原子荧光分光光度计是利用硼氢化钾或硼氢化钠作为还原剂，将样品溶液中的待分析元素还原为挥发性共价气态氢化物（或原子蒸汽），然后借助载气将其导入原子化器，在氩—氢火焰中原子化而形成基态原子。
基态原子吸收光源的能量而变成激发态，激发态原子在去活化过程中将吸收的能量以荧光的形式释放出来，此荧光信号的强弱与样品中待测元素的含量成线性关系,因此通过测量荧光强度就可以确定样品中被测元素的含量。
参考资料来源：百度百科-原子荧光光度计
三、荧光光度法
水样用高氯酸-硫酸-钼酸钠消化，再用盐酸将硒(Ⅵ)还原为硒(Ⅳ)。在酸性条件下，硒(Ⅳ)与2，3-二氨基萘反应生成有绿色荧光的4，5-苯并苤硒脑，用环己烷萃取，在激发波长376nm，发射波长520nm下，进行荧光光度法测定。
本法适用于海水、天然水中总硒的测定，若试样不经酸处理，可直接测定四价硒的含量。方法检出限为0.2μg/L。
去硒硫酸量取200mLH2SO4在搅拌下，徐徐加入200mL水中，加30mLHBr，混匀，置沙浴上加热至冒白烟。
环己烷若有荧光杂质需重蒸馏提纯，用过的环己烷重蒸馏后可再使用。
EDTA溶液(0.2mol/L)称取37gEDTA二钠盐于250mL烧杯中，加适量水，加热溶解，冷却后稀释至500mL。
盐酸羟胺溶液(100g/L)称取10gNH2OH·HCl于100mL烧杯中，用水溶解后，并稀释至100mL。
EDTA-盐酸羟胺混合溶液量取100mL0.2mol/LEDTA、10mL100g/L盐酸羟胺溶液，加水稀释至1000mL。
2，3-二氨基萘(DAN)溶液(1g/L)称取400mgDAN于500mL烧杯中，加400mL0.1mol/LHCl溶解，然后转入1000mL锥形分液漏斗中(漏斗颈部塞有脱脂棉)，在振荡器上振荡15min使其全部溶解。加入80mL环己烷再振荡5min，静置分层后，收集水相，弃去有机相，如此反复纯化数次，直至有机相的荧光强度降到接近纯环己烷的荧光强度为止。将纯化后的DAN溶液贮存于棕色瓶中，加入环己烷使其覆盖液面约1cm厚，置于冰箱中保存，有效期一个月。
高氯酸-硫酸-钼酸钠混合溶液称取7.5g钼酸钠(Na2MoO4·7H2O)溶于150mL水中，加入200mLHClO4和150mL去硒H2SO4，混匀。贮存于500mL试剂瓶中。
硒标准储备溶液ρ(Se)=0.40mg/mL称取0.1405g二氧化硒(SeO2，纯度99.9%)于50mL烧杯中，用适量水溶解后，移入250mL容量瓶中，加0.1mol/LHCl至标线，混匀。
硒标准溶液ρ(Se)=0.100μg/mL用0.1mol/LHCl逐级稀释硒标准储备溶液配制。
甲酚红指示液(0.4g/L)称取40mg甲酚红于100mL烧杯中，加少量水及2滴(1+1)NH4OH溶解，加水至100mL。
取6个50mL烧杯，分别加入0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL和4.00mL硒标准溶液，加水稀释至约10mL，混匀。
加5mL混合酸溶液，在沙浴中加热消化至冒浓白烟，至溶液变黄(约2h)。取下冷却至室温，溶液恢复为无色，用水释至约10mL。加5mLHCl，将烧杯放在沙浴表面加热至溶液变黄为止。取下冷却至室温。
将溶液移到50mL比色管中，用少量水洗净烧杯，洗液并入比色管中。加5mLEDTA-盐酸羟胺混合溶液，4～5滴(0.4g/L)甲酚红指示液，用(1+1)NH4OH或0.1mol/LHCl调节pH为1.5～2.0(粉橙色)，加3.0mLDAN溶液，摇匀，置沸水浴中加热5min取下冷却到室温。将溶液移入60mL分液漏斗中，用少量水洗涤比色管，洗液并入分液漏斗中。加3.0mL环己烷，振摇4min，分层后弃去水相。
将环己烷层从分液漏斗口到入1cm比色皿中，在荧光分光光度计上，以376nm为激发波长，520nm为发射波长，环己烷为参比，测定硒的荧光强度Ii。以荧光强度Ii-I0(标准空白)为纵坐标，相应硒含量(μg)为横坐标绘制校准曲线。
量取5.00～50.0mL海水样，于50mL烧杯中加5mL混合酸溶液，在沙浴中加热消化至冒浓白烟，至溶液变黄(约2h)。以下按制定校准曲线步骤测定荧光强度Iw。同时测定分析空白荧光强度Ib。
由Iw-Ib查校准曲线得硒量，海水样硒浓度的计算参见式(78.30)。
2)在沸水浴上加热5min后，用冷水冷却的时间控制在10min内。否则结果会稍偏低。
3)甲酚红指示剂有两个变色范围，当pH2～3时由红变黄，pH7.2～8.8时由黄变红。本方法中调节pH为1.5～2.0时至粉橙色，pH<1.5为桃红色。因此调pH时要注意颜色变化，必要时可用精密pH试剂确证。
4)玻璃器皿用HNO3溶液浸洗2～3d，洗净后使用。
5)试样制备。海水样品用玻璃或塑料采样器采集，水样应及时经0.45μm滤膜(滤膜预先在0.5mol/LHCl中浸泡12h，用纯水冲洗至中性，密封待用)过滤，并用HNO3酸化至pH<2，贮存于聚乙烯塑料瓶或硬质玻璃瓶中，再以聚乙烯薄膜袋包封样品瓶。
6)水样体积的校正。在量取测定水样之前向水样加入的试剂溶液超过1%体积时，按式(78.31)进行体积校正。
7)水样中硒含量低时，可增加水样体积至50mL，对测定无影响。
如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。
